CETSA技術(shù)基于蛋白質(zhì)對(duì)溫度變化的響應(yīng)。正常時(shí)，蛋白質(zhì)靠獨(dú)特三維結(jié)構(gòu)維持溶解性和穩(wěn)定性以執(zhí)行功能。與配體結(jié)合后，內(nèi)部結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性改變，影響熱穩(wěn)定性。實(shí)驗(yàn)時(shí)，將細(xì)胞或組織裂解液置于溫度梯度處理，用蛋白質(zhì)免疫印跡（WB）、質(zhì)譜（MS）分析蛋白質(zhì)溶解度或豐度變化，繪制熔解曲線。蛋白質(zhì)與配體結(jié)合會(huì)使熔解曲線位移，科研人員借此了解蛋白質(zhì) - 配體相互作用。

樣品制備：細(xì)胞水平研究收集對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，PBS洗滌后用物理或化學(xué)方法制備裂解液；組織水平研究將新鮮組織切碎，緩沖液勻漿后裂解。

溫度梯度處理：將裂解液均分，從37℃起以2 - 5℃間隔升溫至95℃左右，各溫度點(diǎn)孵育5 - 15分鐘。

蛋白質(zhì)分離與檢測：孵育后冰浴冷卻，離心分離變性和未變性蛋白質(zhì)。WB技術(shù)通過電泳、轉(zhuǎn)膜、抗體檢測目標(biāo)蛋白質(zhì)豐度；MS技術(shù)酶解蛋白質(zhì)成肽段，用液相色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用儀分析鑒定和定量。

藥物研發(fā)中鎖定靶點(diǎn)很關(guān)鍵，CETSA技術(shù)檢測藥物處理后細(xì)胞蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性變化，可驗(yàn)證潛在靶點(diǎn)。以抗癌藥研究為例，分析癌細(xì)胞中相關(guān)蛋白質(zhì)，熔解曲線有位移且符合預(yù)期機(jī)制的可能是靶點(diǎn)，能在全細(xì)胞蛋白質(zhì)組篩選新靶點(diǎn)。

細(xì)胞生物學(xué)過程多依賴蛋白質(zhì)相互作用，CETSA技術(shù)通過比較單個(gè)和復(fù)合蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性判斷其相互作用及強(qiáng)弱，可用于研究信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。

細(xì)胞不同生理狀態(tài)下蛋白質(zhì)組有變化，CETSA技術(shù)能捕捉這些變化。如細(xì)胞氧化應(yīng)激時(shí)，檢測抗氧化蛋白質(zhì)熔解曲線可了解其應(yīng)激狀態(tài)。

臨床研究中，CETSA技術(shù)用于組織裂解液，對(duì)比正常和病變組織蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性差異，篩選生物標(biāo)志物，如腫瘤組織中熱穩(wěn)定性不同的蛋白質(zhì)可用于腫瘤診斷。

分析藥物處理后的組織裂解液蛋白質(zhì)變化，可直觀反映藥物療效。如神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物研究，觀察腦組織裂解液中神經(jīng)功能相關(guān)蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性，判斷藥物作用。

不同組織蛋白質(zhì)表達(dá)譜和功能不同，CETSA技術(shù)對(duì)比不同組織裂解液蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性，可發(fā)現(xiàn)特定組織高表達(dá)且熱穩(wěn)定性獨(dú)特的蛋白質(zhì)，有助于揭示組織生物學(xué)特性。

生理相關(guān)性：接近生理?xiàng)l件檢測，還原蛋白質(zhì)狀態(tài)和相互作用，避免干擾，保證結(jié)果真實(shí)可靠。

無標(biāo)記檢測：無需復(fù)雜標(biāo)記，減少步驟和干擾，降低成本，提高效率。

高通量潛力：與質(zhì)譜結(jié)合可一次分析大量蛋白質(zhì)，實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)組系統(tǒng)性研究。